朱曉江¹，尹雙鳳²，桑軍強(qiáng)³
(1.深圳市天健化學(xué)工業(yè)清洗有限公司，廣東深圳518034；
2.清華大學(xué)化學(xué)系，北京100084；3.清華大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程系，北京100084)

　　摘　要：綜述了微生物絮凝劑的研究發(fā)展、絮凝的機(jī)理及其在水處理中的應(yīng)用，并預(yù)示了今后微生物絮凝劑領(lǐng)域的研究將出現(xiàn)的幾個(gè)重要發(fā)展方向。
　　關(guān)鍵詞：微生物絮凝劑；絮凝機(jī)理；水處理
　　中圖分類號(hào)：X17
　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B
　　文章編號(hào)：1000-4602(2001)06-0019-04

　　微生物絮凝劑就是利用生物技術(shù)，從微生物或其分泌物提取、純化而獲得的一種安全、高效、且能自然降解的新型水處理劑，包括糖蛋白、多糖、纖維素、蛋白質(zhì)和DNA等［1］。由于微生物絮凝劑可以克服無(wú)機(jī)高分子和合成有機(jī)高分子絮凝劑本身固有的缺陷，既可生物降解又安全可靠，最終實(shí)現(xiàn)無(wú)污染排放，因此越來(lái)越受到關(guān)注。

1　微生物絮凝劑的研究進(jìn)展

1.1產(chǎn)生絮凝劑的微生物種類
　　具有分泌絮凝劑能力的微生物稱為絮凝劑產(chǎn)生菌，至今發(fā)現(xiàn)的具有絮凝性的微生物已經(jīng)超過17種，包括霉菌、細(xì)菌、放線菌和酵母菌等［2］(見表1)。最早發(fā)現(xiàn)的絮凝劑產(chǎn)生菌是Butterfield于1935年從活性污泥中篩選得到的，至今最具代表性的微生物絮凝劑有以下三種：Nakamura J發(fā)現(xiàn)的醬油曲霉(Aspergillus sojae)產(chǎn)生的絮凝劑AJ7002；Takagi H用擬青霉素(Paecilomyces sp.I—1)產(chǎn)生的微生物絮凝劑PF101，它對(duì)枯草桿菌、大腸桿菌、啤酒酵母、血紅細(xì)胞、活性污泥、硅藻土、纖維素粉、活性炭、氧化鋁等有良好的絮凝效果；Kurane利用紅平紅球菌(Rhodococcus erythropolis)研制成功微生物絮凝劑NOC—1，對(duì)大腸桿菌、酵母、泥漿水、河水、粉煤灰水、活性炭粉水、膨脹污泥、紙漿廢水等均有極好的絮凝和脫色效果，是目前發(fā)現(xiàn)的最好的微生物絮凝劑。

表1　具有絮凝性的微生物種類^［2］ Alcaligenes cupidus協(xié)腹產(chǎn)堿桿菌 Nocardin rhodnii紅色諾卡氏菌 Aspergillus sojae醬油曲霉 Paecilomyces sp.擬青霉屬菌 Aspergillus ochraceus棕曲霉 Pseudomonas aeruginosa銅綠假單胞菌 Aspergillus parasiticus寄生曲霉 Pseudomonas fluorescens熒光假單胞菌 Brevibacterium insectiohilium嗜蟲短桿菌 Pseudomonad faecalic糞假單胞菌 Brown rot fungi棕腐真菌 Rhodococcus erythropolis紅平紅球菌 Corynebacterium brevicale棒狀桿菌 Schizosaccharomyces pombe粟酒裂殖酵母 Geotrichum candidum白地霉 Slaphytococcus aureus金黃色葡萄球菌 Monacus anks赤紅曲霉 Streptomyces grisens灰色鏈霉素 Nocardin restricta椿象蟲諾卡氏菌 Streptomyces vinacens酒紅色鏈霉素 Nocardin calcarea石灰壤諾卡氏菌 White root fungi白腐真菌

1.2 微生物絮凝劑的性質(zhì)及制取
　　Mckinney發(fā)現(xiàn)了積累在細(xì)胞外的多糖類物質(zhì)和細(xì)菌絮凝作用之間的關(guān)系，隨后Buch、Pavoni也從廢水中發(fā)現(xiàn)了絮凝物質(zhì)。一般來(lái)說(shuō)，微生物產(chǎn)生的絮凝物質(zhì)的分子質(zhì)量多在1×10⁵以上，如Sakka的Pseudomonas sp.C—120產(chǎn)生的絮凝物質(zhì)是分子質(zhì)量＞2×10⁶的天然雙鏈DNA。
　　不同的絮凝劑產(chǎn)生菌產(chǎn)生絮凝劑的條件不同，主要影響因素為培養(yǎng)基的碳源、氮源、培養(yǎng)溫度、初始pH值、通氣速度等。如產(chǎn)多糖蛋白類絮凝劑的Rhodococcus erythropolis的最適碳源為葡萄糖、果糖等水溶性糖類，最適氮源為尿素和硫酸銨。而Paecilomyces sp.I—1的最適碳源為淀粉，最適氮源為多肽和酪胺酸。培養(yǎng)基的初始pH值對(duì)微生物產(chǎn)生絮凝劑有影響，最適宜的pH值一般為中性到偏堿性，并且在培養(yǎng)過程中pH有一個(gè)先上升后下降再穩(wěn)定的過程。在培養(yǎng)過程中，最適宜的溫度為25～30 ℃左右，溫度太低會(huì)使菌體活性降低、生長(zhǎng)減慢，溫度太高會(huì)使菌體產(chǎn)生的絮凝劑活性較低。另外，培養(yǎng)基中陽(yáng)離子種類及濃度對(duì)微生物產(chǎn)生絮凝劑也有影響，Sakka等人觀察到Ca2+對(duì)酵母菌產(chǎn)生絮凝劑有誘導(dǎo)作用。在有些情況下，通氣量對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)及產(chǎn)絮凝劑的能力是一個(gè)不可忽略的影響因素，培養(yǎng)初期大量通氣，一方面滿足了生物生長(zhǎng)的需求，另一方面也能防止菌體絮凝成較大的顆粒。
　　從發(fā)酵液中提取和純化微生物絮凝劑的方法有多種，一般采用抽濾或離心的方法去除菌體，然后根據(jù)發(fā)酵液的組分及絮凝物質(zhì)的種類、性質(zhì)而采用乙醇、硫酸銨鹽析、丙酮、鹽酸胍等沉淀獲得。對(duì)于結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的絮凝劑的提取，則需用酸、堿或有機(jī)溶劑反復(fù)溶解、沉淀以得到粗品。絮凝劑的純化一般采用將粗品溶于水或緩沖溶液中，通過離子交換、凝膠色譜純化，也有把粗品溶解、去除不溶物、透析純化的。
1.3　絮凝劑產(chǎn)生菌的基因控制
　　絮凝劑產(chǎn)生的基因控制是一個(gè)復(fù)雜的過程，涉及定位基因與抑制基因的相互作用、定位基因的表達(dá)、絮凝劑的合成和分泌等。目前人們只對(duì)某些細(xì)菌、酵母菌中與絮凝有關(guān)的基因及其產(chǎn)物、絮凝微生物細(xì)胞壁的成分、結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，以期揭開微生物產(chǎn)生絮凝劑的機(jī)制。目前至少發(fā)現(xiàn)了14個(gè)絮凝基因，據(jù)報(bào)道,FL01、FL05、FL08、tupl都是定位于染色體上與絮凝有關(guān)的基因。FL01和FL05絮凝基因都在1號(hào)染色體上，F(xiàn)L08在3號(hào)染色體上，這三個(gè)絮凝基因分子克隆已獲成功。FL05絮凝基因有顯性表達(dá)絮凝性的功能，但其表達(dá)受到親株細(xì)胞結(jié)合型(MAT)遺傳信息的控制。由FL05絮凝基因構(gòu)建出的新菌株所分泌的絮凝素成分不同于FL01，F(xiàn)L05不會(huì)因所在的染色體遭到破壞而失活，但是對(duì)熱處理敏感，F(xiàn)L01絮凝基因正好與此相反
。FL05表達(dá)產(chǎn)物對(duì)糜蛋白酶穩(wěn)定，F(xiàn)L01表達(dá)產(chǎn)物卻易被糜蛋白酶降解。FL08/f10的表達(dá)受MATa/MATa的抑制。
　　Saito等人的研究表明，絮凝微生物與絮凝劑產(chǎn)生菌之間有一定關(guān)系。他們用蛋白酶K處理絮凝微生物的細(xì)胞壁，從細(xì)胞壁上切下一個(gè)使絮凝微生物細(xì)胞對(duì)懸浮細(xì)胞絮凝起主要作用的蛋白質(zhì)，但該蛋白如何在菌體內(nèi)形成，怎樣在細(xì)胞壁上定位以及它與菌分泌出胞外的絮凝劑分子在形成機(jī)制上有何相似之處尚不清楚。
　　Kakka等人發(fā)現(xiàn)絮凝能力是微生物非必需的，從絮凝菌中得到的非絮凝突變子在生長(zhǎng)程度、形態(tài)、生理上與絮凝親本均相同。Henry報(bào)道了一株由質(zhì)粒控制絮凝性狀的細(xì)菌，質(zhì)粒消除后絮凝能力喪失，菌生長(zhǎng)良好。而王鎮(zhèn)等［1］報(bào)道了其所篩選的四種絮凝劑產(chǎn)生菌均不含質(zhì)粒，因而認(rèn)為產(chǎn)生絮凝性的性狀不是由質(zhì)?？刂频?。

2　微生物絮凝劑的絮凝機(jī)理

　　關(guān)于微生物絮凝劑的作用機(jī)理先后提出過很多學(xué)說(shuō)，如Butterfield的粘質(zhì)假說(shuō)，Grabtree的PHB(poly-β-hydroxybutyric acid)酯合學(xué)說(shuō)，F(xiàn)riedman的菌體外纖維素纖絲學(xué)說(shuō)等。目前較為普遍接受的是“橋聯(lián)作用”機(jī)理，該機(jī)理認(rèn)為絮凝劑大分子借助離子鍵、氫鍵和范德華力，同時(shí)吸附多個(gè)膠體顆粒，在顆粒間產(chǎn)生“架橋”現(xiàn)象，從而形成一種網(wǎng)狀三維結(jié)構(gòu)而沉淀下來(lái)。該學(xué)說(shuō)可以解釋大多數(shù)微生物絮凝劑引起的絮凝現(xiàn)象，以及一些因素對(duì)絮凝的影響并為一些實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。例如Levy等人以吸附等溫線和ζ電位測(cè)定表明，環(huán)圈項(xiàng)圈藻PCC—6720所產(chǎn)絮凝劑確實(shí)是以“橋聯(lián)”機(jī)制為基礎(chǔ)的。電鏡照片顯示的聚合細(xì)菌之間由細(xì)胞外聚合物搭橋相連，正是這些橋使細(xì)胞喪失了膠體的穩(wěn)定性而緊密地聚合成凝聚體在液體中沉淀下來(lái)［3］。
　　絮凝劑的分子結(jié)構(gòu)、形狀、分子質(zhì)量和所帶基團(tuán)對(duì)絮凝劑的活性有影響。大分子上要有線形結(jié)構(gòu)，如果分子是交聯(lián)的或支鏈結(jié)構(gòu)，其絮凝效果就差［4］。分子質(zhì)量對(duì)活性也有影響，一般來(lái)說(shuō)，分子質(zhì)量越大，絮凝活性越高，用蛋白酶處理Aspergillus sojae AJ7002產(chǎn)生的絮凝劑活性有所下降就是由于絮凝劑中蛋白質(zhì)組分水解引起多聚物分子質(zhì)量降低而致。一些特殊基團(tuán)由于在絮凝劑中充當(dāng)顆粒物質(zhì)的吸附部位或維持一定的空間構(gòu)像，對(duì)絮凝劑活性影響很大。研究表明，用高錳酸鉀處理Asp絮凝劑的己糖胺多聚物部分，使其氧化而釋放出氧，活性就消失。處理水體中膠體離子的表面結(jié)構(gòu)與電荷對(duì)絮凝效果也有影響，水體中鈣、鎂離子的存在能顯著降低膠體表面的負(fù)電荷，促進(jìn)“架橋”形成。另外，絮凝劑的加入量對(duì)活性也有一定影響，通常有一最佳加入量，過多和過少絮凝劑效果均下降，最佳值大約是固體顆粒表面吸附大分子化合物達(dá)到飽和時(shí)的一半吸附量，因?yàn)檫@時(shí)大分子在固體顆粒上架橋的幾率最大［4］。
　　膠體粒子的表面結(jié)構(gòu)也會(huì)對(duì)絮凝劑的絮凝效率產(chǎn)生影響。研究表明，雖然絮凝劑均具有廣譜絮凝作用，但是對(duì)不同的膠體顆粒表現(xiàn)出不同的絮凝活性［1］。有人研究了Baker′s酵母細(xì)胞的絮凝劑特性，當(dāng)用半刀豆球蛋白A處理后活性喪失，這是因?yàn)槎骨虻鞍着c細(xì)胞表面的甘露糖結(jié)合，覆蓋了細(xì)胞表面，阻止了細(xì)胞與膠體顆粒的結(jié)合。細(xì)胞的年齡對(duì)絮凝作用也有影響，在培養(yǎng)早期，絮凝性不好，隨著發(fā)酵的進(jìn)行，絮凝活性逐漸增加，這可能是因?yàn)榧?xì)胞年齡影響著細(xì)胞壁中的甘露聚糖、葡萄糖和蛋白質(zhì)組分，從而影響絮凝劑效果。
　　絮凝過程是膠體顆粒與大分子相互靠近、吸附并形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的過程，因而大分子與膠體顆粒的表面電荷對(duì)絮凝效果有很重要的影響。體系的pH值直接影響著絮凝劑大分子和膠體顆粒的表面電荷，從而影響著它們之間的靠近和吸附行為。體系中的離子，尤其是高價(jià)異種離子能夠顯著改變膠體的ζ電位，降低其表面電荷，促進(jìn)大分子與膠體顆粒的吸附與架橋。陽(yáng)離子的影響，特別是Ca2+促進(jìn)作用的報(bào)道很多，研究者在研究Ca2+對(duì)環(huán)圈項(xiàng)圈藻產(chǎn)絮凝劑絮凝膨潤(rùn)土的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，Ca2+的加入減少了大分子和懸浮顆粒的負(fù)電荷，增加了懸浮顆粒對(duì)大分子的吸附量，促進(jìn)了架橋的形成。Ca2+不僅可以促進(jìn)絮凝的形成，而且高濃度的Ca2+可以有效地保護(hù)絮凝劑不受降解酶的作用。但也有報(bào)道認(rèn)為體系中鹽的加入會(huì)降低絮凝的活性，這可能是由于離子的加入破壞了大分子與膠體之間氫鍵的形成。有一種生物絮凝劑的活性受緩沖液離子強(qiáng)度的影響,在高離子強(qiáng)度下，大量離子占據(jù)了絮凝劑分子的活性位點(diǎn)，并把絮凝劑分子與固體懸浮顆粒隔開而抑制絮凝［5］。高溫引起生物大分子的變性使其結(jié)構(gòu)和功能破壞，如Kurane報(bào)道S—1生產(chǎn)的含蛋白質(zhì)的絮凝劑在不密封條件下，在100 ℃下加熱1 s后活性下降50%。有的絮凝劑不含高溫變性成分或所含高溫變性成分只是對(duì)分子質(zhì)量的貢獻(xiàn)，而對(duì)高溫不敏感。
　　絮凝的形成是一個(gè)復(fù)雜過程，“架橋”機(jī)理并不能解釋所有現(xiàn)象，絮凝劑的廣譜活性也證明吸附機(jī)理不是單一的。為了更好地解釋機(jī)理，需要對(duì)特定絮凝劑和膠體顆粒的組成、結(jié)構(gòu)、電荷、構(gòu)像及各種反應(yīng)條件對(duì)它們的影響進(jìn)行更深入的探討。

3　微生物絮凝劑在水處理中的應(yīng)用

　　與有機(jī)或無(wú)機(jī)合成高分子絮凝劑相比，微生物絮凝劑具有絮凝范圍廣、活性高、安全無(wú)害、不污染環(huán)境等特點(diǎn)，而且作用條件粗放，大多不受離子強(qiáng)度、pH值及溫度的影響［1、6］，因此可以廣泛應(yīng)用于給水和污水處理。
　?、傩螽a(chǎn)廢水的處理［7］
　　畜產(chǎn)廢水是含BOD較高的難處理有機(jī)廢水，采用合成有機(jī)絮凝劑雖然有較好的效果，但存在二次污染。豬糞尿廢水采用NOC—1加Ca2+處理10 min后，廢水的上清液變成幾乎透明的液體，廢水中的TOC由處理前的8 200 mg/L變?yōu)? 980 mg/L，去除率達(dá)63.7%，OD660由處理前的15.7變?yōu)?.86，濁度去除達(dá)94.5%。
　?、诳上勰嗯蛎洠?］
　　不少工業(yè)廢水在采用活性污泥處理過程中，形成的活性污泥容易發(fā)生膨脹，從而影響處理效率，若添加微生物絮凝劑，會(huì)取得良好效果。如甘草制藥廢水生化處理過程中形成的膨脹性污泥，當(dāng)在其中添加NOC—1微生物絮凝劑后，污泥的SVI很快從290下降到50，消除了污泥的膨脹，恢復(fù)了活性污泥的沉降能力。
　?、劢ú膹U水的處理［8］
　　含有高懸浮物的建筑材料加工廢水也是較難處理的一類廢水，例如陶瓷廠廢水，主要包括胚體廢水和釉藥廢水兩種，前者主要含有較多的粘土顆粒，后者除含粘土顆粒外，還有相當(dāng)數(shù)量的釉藥。當(dāng)添加NOC—1后5 min，胚體廢水的OD從原來(lái)的1.4降低到0.043；釉藥廢水的OD660從17.2下降到0.35；濁度去除率分別為96.6%和97.9%，可得到幾乎透明的上清液。
　?、軓U水的脫色［8、9］
　　現(xiàn)今的活性污泥法技術(shù)除去廢水中的BOD并非難事，但對(duì)于脫色幾乎還沒有特效的方法，特別是對(duì)于那些可溶性色素很難處理，而采用微生物絮凝劑NOC—1，對(duì)墨水、糖蜜廢水、造紙黑液、顏料廢水等進(jìn)行的試驗(yàn)表明，處理后上清液變?yōu)闊o(wú)色透明。辛寶平用P.alcaligenes 8724菌株產(chǎn)生的絮凝劑在實(shí)驗(yàn)室對(duì)紙漿黑液和氯霉素等顏色較深的廢水進(jìn)行脫色處理，其脫色率分別達(dá)95%和98%以上。
　?、萁o水處理［10］
　　鄧述波等人利用含有糖醛酸、中性糖和氨基糖的多糖絮凝劑處理河水，相比于海藻酸鈉、明膠絮凝劑而言，絮團(tuán)大、沉降快、上清液濁度低，而且處理后COD值最小。

4　結(jié)語(yǔ)

　　微生物絮凝劑的研制和開發(fā)應(yīng)用方興未艾，其特性和優(yōu)勢(shì)為水處理技術(shù)的發(fā)展展示了一個(gè)廣闊的前景，決定了它在污水處理等眾多領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。微生物絮凝劑將可能在未來(lái)取代或大部分取代傳統(tǒng)的無(wú)機(jī)高分子和合成有機(jī)高分子絮凝劑。今后微生物絮凝劑領(lǐng)域的研究將出現(xiàn)幾個(gè)重要的發(fā)展方向：
　?、倮矛F(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)把獲得的高效絮凝基因轉(zhuǎn)化到一些有一定可應(yīng)用酶活化或能降解污染物的微生物中，組建工程菌，找出微生物絮凝劑的最佳應(yīng)用場(chǎng)所，既明顯地提高絮凝效果，還可以大大降低絮凝劑的投加量，從而降低處理成本。
　?、趦?yōu)選原料和優(yōu)化生產(chǎn)路線，降低微生物絮凝劑生產(chǎn)成本。例如在NOC—1的培養(yǎng)基中，作為氮源的酵母浸膏價(jià)格比較貴，占NOC—1生產(chǎn)成本的80%。人們研制出用豆餅、水產(chǎn)廢水和牛血取代酵母浸膏后，培養(yǎng)基的價(jià)格下降了2/3以上。另外有些絮凝劑產(chǎn)生菌還能以自然界中或人工合成的高分子物質(zhì)作為培養(yǎng)基碳源，如Corynebacterium hydrocarboclastus可利用煤油生長(zhǎng)并產(chǎn)生絮凝劑。
　　③從天然植物中提取出能釋放激素的生物絮凝劑，如高等海藻和蘆薈。
　　④將酶和激素等促進(jìn)微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)加載到常規(guī)絮凝劑上，實(shí)現(xiàn)生化與絮凝處理的有機(jī)結(jié)合，以期在保證出水水質(zhì)的前提下，縮短生化系統(tǒng)啟動(dòng)和廢水在生化系統(tǒng)的停留時(shí)間，從而將微生物絮凝劑拓展到概念更廣的生物絮凝劑研究范疇。
　　就我國(guó)的微生物絮凝劑的研究而言，起步晚，層次低，正面臨著來(lái)自國(guó)外的競(jìng)爭(zhēng)和環(huán)境質(zhì)量要求越來(lái)越嚴(yán)的挑戰(zhàn)。除鄧德豐和辛寶平、王鎮(zhèn)等人進(jìn)行過基礎(chǔ)研究外，其余僅見一些綜述性報(bào)道文章。因此迫切需要從我國(guó)的實(shí)際國(guó)情出發(fā)，組建較強(qiáng)的科研隊(duì)伍，投入更多的財(cái)力，為我國(guó)微生物絮凝劑的發(fā)展奠定理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。

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