水中輪狀病毒實時定量PCR外標準品的構建
| 論文類型 | 基礎研究 | 發(fā)表日期 | 2008-02-01 |
| 來源 | 環(huán)境科學 | ||
| 作者 | 胡秀華,何苗,劉麗,李丹,施漢昌 | ||
| 關鍵詞 | 輪狀病毒;克隆;標準品;實時熒光定量PCR | ||
| 摘要 | 采用細胞培養(yǎng)和T2A 克隆技術,在輪狀病毒主要結構蛋白VP7 基因序列上設計合成引物,經(jīng)PCR 擴增后將特異性產(chǎn)物連接入pGEM2T2easy 載體中,經(jīng)過酶切鑒定和測序分析獲得輪狀病毒cDNA 標準品. 利用常規(guī)PCR 和實時定量PCR 方法對所獲得的cDNA 標準品進行特異性、穩(wěn)定性和重復性指標的檢驗. 結果表明,利用此標準品制備的標準曲線具有較高的擴增效率和良好的線性關系(斜率為- 31353 , R2 = 01995) ;實時定量PCR 熔解曲線分析表明,溫度在81 ℃±015 ℃的PCR 產(chǎn)物是 | ||
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